弱染色或无染色
< p style=\"MARGIN-TOP: 0px; MARGIN-BOTTOM: 0px\" align=\"left\" class=\"style43\">来源
< p class=\"style42\" style=\"MARGIN-TOP: 0px; MARGIN-BOTTOM: 0px\" align=\"center\">解决方案脱蜡不充分脱蜡切片加长或换新鲜二甲苯无活性一抗更换新一批抗体抗体不因储存不当而起作用将抗体分装成较小的体积并储存在冰箱中（-20 至 -70 C），避免反复冷冻和解冻循环。或按照制造商的说明储存抗体。抗体浓度太低 增加一抗和/或二抗的浓度。或者运行系列稀释测试来检测rmine 提供最佳信噪比的最佳稀释度抗体孵育时间不足增加抗体孵育时间组织固定不充分或不当增加后固定的持续时间或尝试不同的固定剂组织过度固定减少后固定的持续时间。如果组织已经过度固定，请执行适当或推荐的抗原修复程序。不相容的二抗和一抗使用会与一抗相互作用的二抗。例如，如果一抗来自兔，则使用抗兔二抗 无活性的二抗 更换为新批次的抗体 无活性的 ABC 试剂 更换为新批次的试剂 酶底物系统有缺陷或不相容 更换为新批次的试剂 底物孵育时间不足 增加底物孵育时间不正确的封片剂选择正确的封片剂试剂上样顺序错误或步骤省略检查注意事项或使用的程序过度染色
Sources
Solutions
主要和/或二抗太高降低抗体浓度或进行滴定以确定一抗和二抗的最佳稀释度孵育时间太长减少孵育时间孵育温度太高降低孵育温度底物孵育时间太长减少底物孵育时间切片变干避免切片变干高背景
来源
解决方案
切片清洗不充分在步骤之间至少清洗 3 次组织含有内源性酶，如过氧化物酶或碱性磷酸酶，在孵育一抗之前，使用 3% 过氧化氢（阻断过氧化物酶）的甲醇溶液或左旋咪唑溶液（阻断 AP）阻断内源性酶活性。组织含有内源性生物素活性，使用抗生物素蛋白/生物素阻断剂阻断内源性生物素活性一抗孵育前。一抗与组织的非特异性结合或抗体浓度过高。非特异性结合可通过使用更高稀释度的一抗来降低。二抗与组织的非特异性结合用相同的正常血清处理组织物种作为二级抗体。二级抗体与 simil 交叉反应ar 种组织，即兔抗大鼠 IgG 可能与小鼠组织发生交叉反应。使用预吸附的二抗，即使用兔抗大鼠 IgG，小鼠吸附，在小鼠组织上，或使用兔抗小鼠 IgG，大鼠吸附, 在大鼠组织上。由于固定不充分导致组织抗原扩散增加后固定的持续时间小鼠组织上使用的小鼠抗体在一抗孵育前用 MouseOnMouse 阻断剂处理组织部分变干
避免部分变干
